ИСТИНА

Урокиназная система включает в себя сериновую протеазу урокиназу (uPA) и урокиназный рецептор (uPAR). Связыва-ние uPA с uPAR активирует внеклеточный протеолиз и обеспечивает ремоделирование внеклеточного матрикса при регенерации сосудов и нервов. uPA также активирует внутриклеточную сигнализацию, стимулирует миграцию и пролиферацию клеток. Урокиназную систему также относят к навигационным молекулам: было показано влияние uPA и uPAR на процессы морфогенеза при регенерации нервов. Мы исследовали влияние uPAR на активацию внутриклеточной сигнализации, диффе-ренцировку в нейроны и выживаемость клеток нейробластомы Neuro2a. Оказалось, что чем дольше по времени дифферен-цировка в нейроны, тем выше экспрессия uPAR. Через 72 ч после начала дифференцировки экспрессия uPAR была выше на 50% по сравнению с исходным уровнем. При этом uPAR на мембране со-локализовался с рецептором эпидермального фак-тора роста EGFR – важнейшего маркѐра дифференцировки, а при гиперэкспрессии uPAR его со-локализация с EGFR возрас-тала. Известно, что для дифференцировки нейронов важен высокий уровень фосфорилирования EGFR и экспрессия NeuN в ядре. Несмотря на то, что экспрессия uPAR не влияла на экспрессию EGFR и NeuN, тем не менее, блокирование uPAR анти-телами, препятствующими его взаимодействие с uPA, приводило к быстрому (5 мин) снижению уровня фосфорилирования EGFR, а на более отдалѐнных сроках (24 ч) подавляло экспрессию NeuN. Кроме того, блокирование uPAR активировало EGFR-зависимую внутриклеточную сигнализацию в нейронах с участием киназ p38 и Akt, и снижало фосфорилирование киназы Erk1/2. Известно, что такая сигнализация в нейронах снижает жизнеспособность клеток и стимулирует апоптоз, по-этому мы оценили пролиферацию и деградацию ДНК в дифференцированной Neuro2a. Оказалось, что блокирование uPAR приводит к 4-х кратному снижению пролиферации, разрушению ДНК и появлению фрагмента (89 кДа) фермента PARP-1, свидетельствующего об активации аоптотоза. Таким образом, нами впервые показана роль uPAR в поддержании дифферен-цированного состояния нейронов: выживаемость нейронов зависит от активности uPAR как на уровне внутриклеточной сиг-нализации, так и на уровне экспрессии маркѐров дифференцировки. Блокирование uPAR снижает пролиферацию нейронов и индуцирует апоптоз в клетках.