ИСТИНА

Введение. Сурфактин – циклический гептапептид, этерифицированный жир- ной кислотой, востребованное биологическое поверхностно-активное веще- ство, синтезируемое бактериями рода Bacillus. Основной фермент биосинтеза сурфактина – сурфактинсинтетаза, кодируемая опероном srfA, для актива- ции биосинтеза сурфактина необходим белок Sfp. Штамм PY79 не способен к синтезу сурфактина из-за мутации в гене sfp. Мы предлагаем новый способ стимуляции биосинтеза сурфактина в клетках B. subtilis посредством малых некодирующих 6S-1 и 6S-2 РНК. Объекты исследования - клетки штамма PY79 и его производные с нокаутом генов 6S РНК. Цель работы: 1) исследование влияния 6S-1 и 6S-2 РНК на транскрипцию генов оперона srfA; 2) восстановление синтеза сурфактина в клетках штамма PY79. Методы. кПЦР с ОТ, колориметрический метод определения количества сурфактина, валидация ВЭЖХ, методы генетической инженерии Результаты. С помощью набора делеционных мутантов показано, что 6S РНК участвуют в регуляции биосинтеза сурфактина в клетках B. subtilis PY79. Делеция гена 6S-1 РНК, но не гена 6S-2 РНК, и двойная делеция ге- нов обеих 6S РНК приводит к повышению эффективности транскрипции опе- рона srfA в поздней стационарной фазе роста (28 ч) примерно в 3 раза. На экспрессионной плазмиде pHT01 был внесен интактный ген sfp из штамма NCIB 3610 в компетентные клетки B. subtilis PY79 дикого типа. Количество сурфактина, синтезируемого ими, - 147 мг/л среды (24 ч), что в 1,4 раза боль- ше синтезируемого сурфактина клетками NCIB 3610 (110 мг/л). Проводятся эксперименты по восстановлению сурфактин-продуцирующей активности в делеционных клетках с нокаутом гена 6S-1 РНК, а также исследование изо- формного состава продуцируемого сурфактина. Выводы. 1. Делеция 6S-1 РНК, но не 6S-2 РНК, приводит к увеличению эффективности транскрипции оперона srfA в штамме PY79. 2. Получены трансформированные клетки B. subtilis PY79 дикого типа с вос- становленной сурфактин-продуцирующей активностью.