![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ФИЦ ПХФ и МХ РАН |
||
1. Способ получения рекомбинантного белка SAV-RGD, представленного в Перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 2, специфически узнающего клетки меланомы человека, включающий следующие стадии: - культивирование в питательной среде штамма бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, - продуцента указанного рекомбинантного белка SAV-RGD, в питательной среде с рН-статированием в диапазоне рН 7,5-7,8, сниженной аэрацией за счёт перемешивания со скоростью 450±50 об/мин, подпиткой источником углерода в течение первой части культивирования и источником аминокислот в течение второй части культивирования; - получение периплазматической фракции клеток указанного штамма-продуцента рекомбинантного белка SAV-RGD; - очистка рекомбинантного белка SAV-RGD методом ионообменной хроматографии с последующей ультрафильтрацией; и - лиофилизация очищенного рекомбинантного белка SAV-RGD. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при культивировании в качестве источника углерода используют глюкозу, при этом контролируют скорость подпитки таким образом, чтобы конечная концентрация глюкозы в питательной среде не превышала 1 – 2 г/л, а в качестве источника аминокислот используют пептон и/или дрожжевой экстракт. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что при получении периплазматической фракции клеток штамма-продуцента рекомбинантного белка SAV-RGD используют соотношение объёмов лизирующего буфера, содержащего лизоцим в концентрации 1 г/л, и биомассы клеток 1:20. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве носителя в методе ионообменной хроматографии используют SP-сефарозу, а ультрафильтрацию проводят с использованием мембраны с размером пор 30 кДа.