![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ФИЦ ПХФ и МХ РАН |
||
1. Способ получения кардиомиоцитарных клеток, заключающийся в том, что выделяют клетки, перемешивают с добавлением раствора в стерильных условиях, полученную суспензию центрифугируют, высевают на куртуральные чашки, культивируют в стандартных условиях (37°С 5% СО2), отличающийся тем, что выделяют клетки из менструальной крови путем отжима гигиенического тампона, получая моноклеарную фракцию эндометрия, перемешивают эту фракцию с добавлением раствора Хэнкса в объеме равном объему осадка и добавлением амфотерицина В и пенициллина/стрептомицина, ценрифугируют в градиенте плотности g=400 cм2/с в течение 30 мин, выделенные моноклеарные клетки формируют в толще фиколла «интерфазное кольцо», высевают на чашки Петри, добавляя полную ростовую среду, культивируют стволовые клетки эндометрия в течении 10-15 дней меняя полную ростовую среду раз в 2 дня, дополнительно осуществляют миогенную дифференцировку стволовых клеток эндометрия в среде, высевая их после 2 пассажа на чашки для культуральных работ, покрытых фибронектином в плотности 1,9 104 кл/мл, добавляя 10 µМ 5-азацитидина и раствор основного фактора роста фибробластов. 2. Способ получения кардиомиоцитарных клеток по п.1, отличающийся тем, что в качестве раствора основного фактора роста фибробластов взят гепарин зависимый. 3. Способ получения кардиомиоцитарных клеток по п.1, отличающийся тем, что для миогенной дифференцировки взята среда Cambrex, East Rutherford, NJ, cc-3245. NOVELTY - Isolating and obtaining cardiomyocyte cells, involves separating a cells from mixture of cells, preparing monoclear fraction of endometrium, mixing fraction with Hanks's solution to obtain sediment, adding e.g. amphotericin B to sediment, centrifuging sediment, isolating monoclear cells, sowing cells to Petri cups, culturing the stem cells, subjecting the stem cells to myogenic differentiation in a medium, sowing the differentiated cells to the cups for culture works, and adding azacytidine and solution of basic factor of growth of fibroblasts to the cells. USE - The method is useful for isolating and obtaining cardiomyocyte cells. ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ - Method of isolating and obtaining cardiomyocyte cells, involves separating the cells from mixture of cells including menstrual blood by squeezing of hygiene tampon, preparing monoclear fraction of endometrium, mixing the fraction with Hanks's solution in the equal volume to volume to obtain a sediment, adding amphotericin B and penicillin/streptomycin to the sediment, centrifuging the sediment in density gradient of 400 sm2 for 30 minutes, isolating monoclear cells formed in the thickness of ficcola at interphase ring, sowing the cells to Petri cups, adding Petri cups to a growth medium, culturing the stem cells of endometrium in a growth medium for 10-15 days, changing the complete growth medium in 2 days, subjecting the stem cells of the endometrium to myogenic differentiation in a medium, sowing the differentiated cells after 2 passages to the cups for culture works, adding fibronectin with the density of 19x 104 cells/mm to the cultured cells, adding 10 mu m of azacytidine and solution of basic factor of growth of fibroblasts to the cells. Международная патентная классификация: C12N-005/0735 Коды классов Derwent: B04 (Natural products and polymers, testing, compounds of unknown structure); D16 (Fermentation industry); F07 (Other textile applications, clothing design, accessories, fasteners); D22 (Sterilising, bandages, dressing and skin-protection agents) Система классификации Derwent: B04-F02; B04-H06G; B04-H20A; B11-B03A; B12-M17; D05-H08; D05-H13; F04-E04