ИСТИНА

К паранеопластическим антигенам относятся белки, которые в норме высокоспецифичны для нервной системы, однако при злокачественной трансформации они могут экспрессироваться также клетками опухолей, локализованных вне нервной системы. При попадании в кровяное русло паранеопластические антигены инициируют аутоиммунный процесс, в результате которого вырабатываются аутоантитела, способные преодолевать гематотканевый барьер и вызывать развитие паранеопластического неврологического синдрома. Одним из паранеопластических антигенов является фоторецепторный кальций-связывающий белок рековерин. Аберрантная экспрессия этого белка клетками некоторых опухолей может индуцировать аутоиммунный ответ, приводящий к развитию паранеопластической дегенерации сетчатки. Ранее нами была детально исследована аберрантная экспрессия рековерина в опухолях легких [Bazhin A.V. et al. Lung Cancer. 2001;34:99-104; Savchenko M.S. et al. Lung Cancer. 2003;41:363-7; Bazhin A.V. et al. Lung Cancer. 2004;44:193-8]. Однако вопрос о том, какова роль рековерина при злокачественной трансформации, до сих пор остается открытым. В настоящем проекте исследуется функция рековерина в опухолевых клетках на модели клеточной линии ретинобластомы Y79. За отчетный период проводилась работа по следующим задачам: (1) установить локализацию рековерина в клетках ретинобластомы Y79 со спонтанной экспрессией рековерина; (2) определить способность рековерина взаимодействовать с различными субклеточными структурами; (3) получить стабильную клеточную линию ретинобластомы Y79 с нокдауном гена рековерина.

Методом световой микроскопии и проведенной затем объемной реконструкции клеток с использованием серийных оптических срезов установлено, что рековерин распределен неравномерно в цитоплазме клеток ретинобластомы Y79. Методом электронной микроскопии с использованием антител, конъюгированных с золотом, обнаружено, что рековерин не связан ни с плазматической мембраной, ни с ядерной мембраной клеток ретинобластомы Y79. В настоящее время ведутся эксперименты с целью ответа на вопрос о связи рековерина с мембранами эндоплазматического ретикулома (ЭПР). Нами проведено три серии экспериментов по получению стабильной клеточной линии ретинобластомы Y79 с нокдауном гена рековерина. В одной из серий трансфекция прошла успешно и в результате были получены трансфицированные клетки, где процент трансфектантов составил 30%. Полученные клетки в настоящий момент продолжают культивироваться с целью получения достаточного количества трансфектантов для использования в последующих экспериментах.